氣化過氧化氫的滅菌技術(shù)及其驗(yàn)證分析

本文來源：上海斐而瑞制藥設(shè)備有限公司      發(fā)布時(shí)間：2018-07-06      點(diǎn)擊次數(shù)：

從空間消毒滅菌的定義入手，介紹了幾種常見的消毒滅菌方法，詳細(xì)闡述和比較了過氧化氫蒸汽滅菌技術(shù)、 過氧化氫干霧滅菌技術(shù)，并對(duì)氣化過氧化氫滅菌器及其驗(yàn)證進(jìn)行了探討說明。

 隨著新版GMP的實(shí)施和推廣，我國對(duì)無菌藥品的生產(chǎn)提出了更高的要求。 滅菌一直以來都是無菌藥品生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，為了提高產(chǎn)品的質(zhì)量，選擇合適的滅菌方式就顯得尤為重要。在當(dāng)前各種滅菌技術(shù)當(dāng)中，氣態(tài)過氧化氫（H2O2）滅菌被 公認(rèn)為理想的滅菌方式。 氣態(tài)過氧化氫滅菌方式正迅速成為用于制藥、 生物和醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)的生物凈化的新選擇，其對(duì)生物指示劑——嗜熱脂肪芽孢桿菌能夠達(dá)到106的殺滅率。

1、空間消毒滅菌

 廣義的空間消毒包括空間消毒和空間滅菌，是指能殺死一定空間內(nèi)的病原微生物，但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法，通常使用化學(xué)的方法來達(dá) 到消毒的目的。用于消毒的化學(xué)藥物叫做消毒劑。

空間滅菌是指把物體上所有的微生物（包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)）全部殺死的方法，通常用物理方法來達(dá)到滅菌的目的。

GMP（2010年修訂）中規(guī)定的藥品生產(chǎn)各級(jí)別潔凈區(qū)內(nèi)的空氣懸浮粒子檢測(cè)和微生物檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。

 圖1

 

2、消毒滅菌方法

 紫外線消毒

紫外線的殺菌能力隨環(huán)境溫度、 濕度、 風(fēng)速等因素變化。在環(huán)境溫度20 ℃、相對(duì)濕度40%～60%時(shí)，效果好；在環(huán)境溫度0 ℃時(shí)，輻射能力低于60%，相對(duì)濕度＞60%，輻射能力降低。另外，殺菌能力隨使用時(shí)間的增加而降低，紫外燈的平均壽命為2 000 h左右。

 紫外線可以殺滅多種微生物，包括細(xì)菌繁殖體、 芽胞、 病毒、 真菌、 支原體等，消毒使用的紫外線是200～275nm的C波紫外線，殺菌作用最強(qiáng)的波段處于250～270nm范圍內(nèi)。紫外線的殺菌效果與紫外線的輻射強(qiáng)度有直接關(guān)系，消毒使用的紫外線滅菌燈光源產(chǎn)生的輻射值必須能夠達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)（在電壓220V、環(huán)境相對(duì)濕度60%、溫度20 ℃時(shí)，紫外線強(qiáng)度不得低于70 μW/cm2）。為了獲得滿意的紫外線輻射強(qiáng)度，就需要對(duì)紫外燈的玻璃管、 反射罩和使用壽命提出相應(yīng)要求。此外，紫外燈的輻射強(qiáng)度隨照射距離的增加而減弱。

 紫外線滅菌可能會(huì)對(duì)人體造成損傷，如直接照射在眼睛上，會(huì)引起結(jié)膜炎或角膜炎等。WHO和歐盟GMP規(guī)定：由于紫外線滅菌效果有限，不得替代化學(xué)消毒；最終滅菌環(huán)節(jié)不能使用紫外照射法滅菌。

 甲醛熏蒸滅菌

對(duì)潔凈室氣體進(jìn)行消毒的傳統(tǒng)辦法是將消毒液通過蒸發(fā)來熏蒸消毒，通常所用的消毒液有環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、甲醛溶液等。以甲醛熏蒸滅菌為例，當(dāng)濕度在65%左右、溫度在24～40 ℃時(shí)，甲醛的消毒效果最好，其消毒滅菌原理主要是由于甲醛能破壞微生物的活性成分而達(dá)到消毒的目的。 通常將甲醛溶液倒入高錳酸鉀中對(duì)潔凈室的空氣進(jìn)行消毒，這主要是因?yàn)楦咤i酸鉀遇到甲醛后會(huì)釋放大量的熱，使甲醛蒸發(fā)彌漫到空氣當(dāng)中。甲醛蒸汽具有強(qiáng)烈的刺激性氣味，屬于高毒性質(zhì)物品，具有致癌性。

 臭氧消毒

臭氧（O3）是有毒、淡藍(lán)色、不穩(wěn)定的極強(qiáng)氧化劑，相對(duì)氣體密度為1.657。臭氧是一種廣譜高效消毒劑，具有強(qiáng)烈的殺菌消毒作用。臭氧在常溫下不穩(wěn)定，極易分解成氧分子與氧原子，氧原子具有氧化性，能破壞微生物的細(xì)胞膜從而將其殺死，其多余的氧原子會(huì)自動(dòng)結(jié)合成氧分子，不會(huì)產(chǎn)生有毒的殘留物。產(chǎn)生臭氧的原料是氧氣與電能，通常由臭氧發(fā)生器產(chǎn)生臭氧。

 臭氧屬于有害氣體，當(dāng)濃度為6.25×10-6 mol/L（0.3mg/L）時(shí)，眼、鼻、喉有刺激的感覺；當(dāng)濃度為（6.25～62.5）×10-5 mol/L（3～30mg/L）時(shí)，會(huì)出現(xiàn)頭疼及呼吸器官局部麻痹等癥狀；當(dāng)臭氧濃度為3.125×10-4～1.25×10-3 mol/L （15～60 mg/L）時(shí)，則對(duì)人體有危害。

 氣態(tài)過氧化氫滅菌

過氧化氫（雙氧水）自身是一種消毒劑，從過氧化氫的分子式中就可以完全免除有毒或有害的嫌疑，并且滅菌過程低溫、 低濕、 快速，完全符合未來滅菌設(shè)備的發(fā)展方向。 過氧化氫是一種高密度的氧化劑，具有放熱分解成水蒸氣和氧的特性。過氧化氫主要通過氧化作用滅菌，且分解后無殘留毒性。氣態(tài)過氧化氫（H2O2）滅菌分為過氧化氫蒸汽（HPV）滅菌技術(shù)和過氧化氫干霧（VHP）滅菌技術(shù)兩種。

 3、過氧化氫蒸汽 （ HPV） 滅菌技術(shù)

 過氧化氫蒸汽 （ HPV） 滅菌技術(shù)的原理

過氧化氫蒸汽滅菌采用雙循環(huán)技術(shù)，結(jié)合PLC程控將滅菌循環(huán)的效果最佳化，當(dāng)過氧化氫在房間或艙體的表面消毒滅菌時(shí)，將一層均勻的 “微凝結(jié)”過氧化氫分布到所有表面，可以將 “微凝結(jié)” 視為一個(gè)肉眼看不到的H2O2的微薄膜。這個(gè)階段可以在顯微鏡下看到一個(gè)肉眼不可見的亞微米級(jí)的過氧化氫薄層，科學(xué)研究證實(shí)，這個(gè)低溫、 無殘留的過程已經(jīng)在蒸汽發(fā)生階段就開始?xì)缥⑸铩?/span> 過氧化氫通過復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)解離具有高活性的羥基，破壞細(xì)胞膜。微冷凝的形成確保了微生物殺滅的最佳條件，當(dāng)達(dá)到凝露點(diǎn)時(shí)，殺死90%微生物的數(shù)量所用的時(shí)間最短。 從滅菌動(dòng)力學(xué)曲線可以看到微生物的數(shù)量陡降，伴隨著微冷凝的形成，生物指示劑數(shù)量曲線從舒緩變得急劇下降。

 過氧化氫蒸汽 （ HPV） 的滅菌工藝

調(diào)節(jié)：對(duì)空氣的相對(duì)濕度進(jìn)行調(diào)整，并提高空氣溫度。
梯度氣體注入：過氧化氫氣體持續(xù)注入到空氣流中，使得過氧
化氫濃度迅速上升。
保持氣體注入：維持凈化所需的過氧化氫氣體的濃度。
通風(fēng)：停止過氧化氫氣體的注入，將環(huán)境內(nèi)的空氣進(jìn)行置換，通過裂解劑裂解過氧化氫，最終使過氧化氫全部排出。

 4、過氧化氫干霧 （ VHP） 滅菌技術(shù)

過氧化氫干霧滅菌又稱氣化過氧化氫 ，即Vaporized Hydrogen Peroxide，VHP。過氧化氫干霧滅菌法是利用物理手段將液體轉(zhuǎn)變成氣溶膠狀態(tài)的干霧，讓其彌散在需要滅菌的空間。過氧化氫在常溫下的氣體狀態(tài)比液體狀態(tài)具有更強(qiáng)的殺孢子能力，經(jīng)生成游離的氫氧基，用于進(jìn)攻細(xì)胞成分，包括脂類、蛋白質(zhì)和DNA，達(dá)到完全滅菌的要求。 其常用于凍干機(jī)、隔離器、房間、RABS、灌裝線以及不同配置的操作/生產(chǎn)領(lǐng)域等密閉空間的滅菌。

過氧化氫干霧 （ VHP） 滅菌的原理

過氧化氫因具有氧化還原作用而具有殺菌效果，特別對(duì)厭氧芽孢桿菌的殺滅效果最好。過氧化氫的作用原理是通過復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)解離具有高活性的羥基，用于攻擊細(xì)胞的成分，包括破壞細(xì)胞膜、 脂類、 蛋白質(zhì)和DNA。 通過 “閃蒸” 將液態(tài)H2O2轉(zhuǎn)化為過氧化氫干霧，此過程可在常溫常濕的環(huán)境下有效進(jìn)行，不需要進(jìn)行除濕等特別的預(yù)處理。過氧化氫干霧被均勻地引入密閉空間，其內(nèi)表面完全暴露于過氧化氫干霧中，形成約1 μm的過氧化氫膜，附著在可能寄居了微生物的表面，微生物自身會(huì)作為核心被形成的微冷凝所包裹，并迅速在此過程中被殺滅。

根據(jù)消毒技術(shù)規(guī)范要求，滅菌的目標(biāo)定為生物指示劑（BIS）達(dá)到106的殺滅率，通常使用的生物指示劑（BIS）為黑色枯草芽孢桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌。 完成消毒后的過氧化氫干霧（VHP）被催化分解為水蒸氣和氧氣，也可以使用強(qiáng)力通風(fēng)裝置對(duì)其完全分解，或者使用建筑空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)，對(duì)凍干機(jī)來說可以借用其抽真空系統(tǒng)迅速去除殘留的過氧化氫干霧。

過氧化氫干霧具有很好的殺滅細(xì)菌芽孢的作用，作為一種消毒滅菌介質(zhì)，濃度為35%的雙氧水通過過氧化氫干霧（VHP）發(fā)生器汽化，對(duì)被滅菌物進(jìn)行消毒滅菌。實(shí)驗(yàn)證明，過氧化氫干霧的殺滅細(xì)菌芽孢的能力強(qiáng)于同數(shù)量級(jí)的液態(tài)雙氧水， 750～2 000 μg/L濃度的過氧化氫干霧的滅菌效果等同于300 000 mg/L濃度的液態(tài)雙氧水。低濃度滅菌也相應(yīng)降低了被消毒表面的材質(zhì)要求與成本。 過氧化氫干霧滅菌操作的溫度范圍可以適應(yīng)在4～80 ℃之間，一般室溫即可。 在消毒滅菌過程中，過氧化氫干霧被還原成水與氧氣，與其他滅菌方式相比，沒有危害性的殘留物，對(duì)操作人員及環(huán)境無危害。

 過氧化氫干霧 （ VHP） 滅菌技術(shù)的特性

 特點(diǎn)：
（1）消毒滅菌可以在室溫條件下進(jìn)行；
（2）消毒周期短，過氧化氫干霧的消毒周期只需5～7 h，而蒸汽消毒周期為8～10 h，環(huán)氧乙烷氣體消毒滅菌周期為12～18 h；

（3）過氧化氫干霧消毒滅菌對(duì)操作人員無危害，對(duì)環(huán)境無污染，其最終殘留物為水和氧氣；
（4）蒸汽滅菌使腔室產(chǎn)生很大的壓差變化，長(zhǎng)期反復(fù)受壓、抽真空，會(huì)縮短設(shè)備的使用壽命，而采用過氧化氫干霧滅菌，因壓力、溫度條件的改善，使設(shè)備的運(yùn)行壽命和維修周期得以延長(zhǎng)；
（5）長(zhǎng)期使用蒸汽滅菌，濕熱氣體易破壞腔體內(nèi)表面的不銹鋼鈍化膜，而過氧化氫干霧滅菌則很少損害腔體內(nèi)表面的不銹鋼鈍化膜；
（6）采用移動(dòng)式（帶腳輪）的過氧化氫干霧（VHP）發(fā)生器，能對(duì)多臺(tái)設(shè)備配套滅菌，減少設(shè)備的初投資費(fèi)用；
（7）過氧化氫干霧菌的工藝重復(fù)性好，較易通過驗(yàn)證測(cè)試；
（8）對(duì)高效過濾器HEPA的穿透性好（玻璃纖維）；
（9）對(duì)于其他物品無影響，如裝置、 電器、潔凈室墻板等。

優(yōu)點(diǎn)：
低溫、快捷，適用于不耐高溫、濕熱的器械，被滅菌材料和物品的范圍廣，對(duì)器械損耗少，有完善的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

缺點(diǎn)：
（1）人體接觸過多的過氧化氫可致皮炎、支氣管或肺臟疾病，經(jīng)口中毒時(shí)會(huì)出現(xiàn)腹痛、胸口痛、呼吸困難、嘔吐、體溫升高、結(jié)膜和皮膚出血癥狀，個(gè)別出現(xiàn)視力障礙、痙攣、輕癱；
（2）不能用于處理植物纖維素制品，如棉布、 亞麻布和紙；不能用于處理尼龍和聚酯纖維和活體；不能用于處理長(zhǎng)40 cm以上、 直徑3 mm以下或有盲管、 尖角的器械；不能用于處理有機(jī)物與無機(jī)物污染以及先滅菌后清洗的器械。

過氧化氫干霧滅菌工藝

除濕
將空氣的相對(duì)濕度減少至參數(shù)設(shè)置點(diǎn)，使空氣可以作為過氧化氫氣體的載體，并在凈化階段維持過氧化氫氣體的濃度在飽和露點(diǎn)水平之上。

調(diào)節(jié)
過氧化氫氣體持續(xù)注入到干燥的空氣流中，置換滅菌目標(biāo)環(huán)境中的空氣，使得過氧化氫濃度迅速上升。

凈化
維持凈化所需的過氧化氫氣體的濃度。

通風(fēng)

停止過氧化氫氣體注入，對(duì)環(huán)境內(nèi)的空氣進(jìn)行置換，通過裂解劑裂解過氧化氫，最終使過氧化氫全部排出。

 5、過氧化氫蒸汽 （HPV）和過氧化氫干霧（VHP）滅菌技術(shù)的比較

過氧化氫蒸汽（HPV）過氧化氫干霧（VHP）滅菌技術(shù)的比較如表2所示。過氧化氫干霧消毒滅菌作為最為安全、穩(wěn)妥的過氧化氫滅菌方式，受限于嚴(yán)苛的工藝要求，相對(duì)濕法滅菌需要冗長(zhǎng)的滅菌周期，一直被濕法工藝的擁護(hù)者們指責(zé)。濕法（微冷凝）工藝依據(jù) “必須要有一定的濕度才能達(dá)到和保證滅菌效果”的理論，但研究早已證明干法滅菌的效果絲毫不遜于濕法。

圖2

 6、干法氣化過氧化氫（DVHP）滅菌技術(shù)

干法氣化過氧化氫（DVHP）滅菌是一種改良的干法工藝，既具備干法過氧化氫滅菌的優(yōu)點(diǎn)，又具備微冷凝法所有的便利。

（1）均勻分布的過氧化氫氣體濃度更低，且可以進(jìn)行矩陣式監(jiān)控；

（2）全程高速除濕，保證周期內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)冷凝現(xiàn)象；

（3）對(duì)于環(huán)境的要求不高，選配的附件滿足各種應(yīng)用需求；

（4）滅菌速度更快，EHS保證更高，滅菌的效果可以重現(xiàn)。

 7、氣化過氧化氫滅菌器

氣化過氧化氫滅菌器是經(jīng)專門設(shè)計(jì)制造而成的一種用于氣閘間、隔離器、傳遞艙、混粉機(jī)、離心機(jī)、凍干機(jī)、原料藥密閉式（c-RABS）分裝、小型潔凈室等密閉空間滅菌的專用設(shè)備，亦可用于灌裝線RABS的在線滅菌。氣化過氧化氫滅菌器將 干法氣化過氧化氫（DVHP）發(fā)生器、蒸汽噴射和通風(fēng)單元整合為一個(gè)移動(dòng)系統(tǒng)，用戶通過觸摸屏進(jìn)行本地或遠(yuǎn)程無線操作。

 氣化過氧化氫滅菌器的特點(diǎn)

（1）快速、 自動(dòng)的房間/區(qū)域滅菌，最大滅菌空間高達(dá)300m3；
（2）可移動(dòng)系統(tǒng)，靈活機(jī)動(dòng)，可輕松轉(zhuǎn)移到需要滅菌的區(qū)域；
（3）一體化可拆卸底座，控制單元和無線數(shù)據(jù)影音傳輸可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程操作、 監(jiān)控；
（4）廣譜殺菌，滅菌水平高；
（5）低溫生物凈化過程，自循環(huán)過氧化氫降解分解單元；
（6）良好的材料兼容性，包括敏感電子元器件、儀器儀表；
（7）雙回路技術(shù)可快速有效地進(jìn)行生物滅菌循環(huán)，過氧化氫消耗低；
（8）內(nèi)置過氧化氫分解媒，多余的過氧化氫可分解為水和氧氣，

整體達(dá)到無殘留；

（9）全部數(shù)據(jù)可打印記錄，大容量的歷史記錄存儲(chǔ)。

 滅菌循環(huán)的4個(gè)階段

準(zhǔn)備階段
對(duì)蒸發(fā)器、 管道和腔體進(jìn)行預(yù)熱，防止過氧化氫氣體冷凝。

汽化階段
過氧化氫溶液滴落到蒸發(fā)器后，形成氣化過氧化氫，噴射入滅菌空間內(nèi)，直至達(dá)到飽和狀態(tài)，此狀態(tài)對(duì)微生物有最好的殺滅效果。

維持階段
不斷會(huì)有氣化過氧化氫被噴射入空間內(nèi)，維持氣化過氧化氫的飽和狀態(tài)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)滅菌表面的持續(xù)覆蓋和對(duì)微生物的持續(xù)殺滅。

通風(fēng)階段
滅菌空間內(nèi)的氣化過氧化氫通過催化過濾器被分解為氧氣和水蒸氣，也可采用輔助通風(fēng)設(shè)備將蒸汽排出傳遞艙外，直至監(jiān)測(cè)到的過氧化氫濃度低于1 ppm。

 8、氣化過氧化氫滅菌器的驗(yàn)證

 設(shè)備工藝或性能要求

（1）噴霧顆粒平均小于10 μm，可提供粒徑證明；
（2）過氧化氫滅菌系統(tǒng)的滅菌效果應(yīng)不低于傳統(tǒng)的甲醛熏蒸效果，對(duì)黑色枯草芽孢桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子生物指示劑可以達(dá)到106的殺滅率，即下降6個(gè)對(duì)數(shù)單位；
（3）可提供滅菌氣體的證明材料，對(duì)潔凈室及設(shè)備的相容性說明應(yīng)包括：金屬（主要是不銹鋼、鋁合金、銅等） 、工程塑料、橡 膠、潔凈室墻板頂板、PVC地面、環(huán)氧樹脂自流平地面、高效送風(fēng)口、回風(fēng)口、有機(jī)玻璃、插座、開關(guān)、電話、現(xiàn)場(chǎng)顯示儀表等；
（4）噴干霧裝置在噴干霧時(shí)必須能保證噴出的干霧能均勻擴(kuò)散到房間各個(gè)部位，沒有局部分布不均勻或設(shè)備漏液現(xiàn)象；
（5）環(huán)境溫度：（22±2）℃，環(huán)境濕度：45%～55%；
（6）設(shè)備配置可遠(yuǎn)程無線遙控器，使滅菌過程實(shí)現(xiàn)無人值守（提高效率、方便實(shí)用）；
（7）設(shè)備表面及所有部件應(yīng)便于清潔，不能有清潔死角，外表面均拋光光滑，符合衛(wèi)生要求；
（8）應(yīng)有相關(guān)的驗(yàn)證支撐確保滅菌以后的滅菌劑殘留不會(huì)與藥品直接接觸，不會(huì)對(duì)藥品構(gòu)成任何形式的污染；
（9）在設(shè)備有故障或失效的情況下，元件必須包含必要的保護(hù)裝置，以確保設(shè)備和物品保持在一個(gè)安全的狀態(tài)。

 安全要求確認(rèn)

（1）設(shè)備上易對(duì)操作人員造成傷害的運(yùn)動(dòng)部位應(yīng)有安全罩；
（2）設(shè)備任何部位不能有鋒利的邊緣和尖角；
（3）易于接近人體的區(qū)域安裝緊急停止按鈕，以減少人機(jī)工程傷害；
（4）斷電時(shí)，機(jī)器逐漸停穩(wěn)，以保護(hù)操作人員、設(shè)備和產(chǎn)品的安全；
（5）恢復(fù)供電后機(jī)器不能自動(dòng)開機(jī)，必須人工啟動(dòng)；
（6 ）電氣系統(tǒng)的安全性能應(yīng)符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。

 電力及控制系統(tǒng)確認(rèn)

（1）所有線纜均有標(biāo)號(hào)并有連接線路圖；
（2）設(shè)備具有接地線；
（3）所有電纜終端應(yīng)卷曲包好線頭做好相應(yīng)標(biāo)記；
（4）所有控制配線必須采用低電壓控制系統(tǒng)；
（5） 系統(tǒng)應(yīng)具有診斷功能以識(shí)別和闡述故障，顯示導(dǎo)致設(shè)備停機(jī)的故障；
（6）有良好的人機(jī)界面，操作安全可靠，可顯示設(shè)備主要運(yùn)行參數(shù)。

 運(yùn)行確認(rèn)

安裝結(jié)束后，對(duì)過氧化氫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)試運(yùn)行，電源開關(guān)和啟動(dòng)按鈕是否能正常打開，液體噴射是否正常。

 啟動(dòng)按鈕工作狀態(tài)確認(rèn)：

連接電源線，打開電源開關(guān)，按下啟動(dòng)按鈕，記錄電源開關(guān)指示燈

狀態(tài)，記錄按下啟動(dòng)按鈕倒計(jì)時(shí)。15 s后的設(shè)備運(yùn)行狀況，測(cè)定3

次。

可接受標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)備連接電源后打開電源開關(guān)，電源開關(guān)指示燈亮。按下啟動(dòng)按鈕后，設(shè)備發(fā)出15 s蜂鳴聲之后開始運(yùn)行。 

單位時(shí)間噴嘴噴霧流量及殘液量測(cè)試

按照設(shè)計(jì)要求，設(shè)備開始噴射后，其噴射量為1 000 mL/h

（1）測(cè)試方法：在殺孢子劑卡位上，用專用的殺孢子劑瓶放置一瓶1 000 mL的純水，連接電源，調(diào)節(jié)噴射量到1 000 mL位置，開始噴霧，同時(shí)記錄開始時(shí)間，當(dāng)噴嘴不再噴霧時(shí)再記錄時(shí)間，關(guān)閉電源，取下殺孢子劑專用瓶，用經(jīng)校準(zhǔn)后的量筒計(jì)量罐內(nèi)殘液量。 重復(fù)上述過程2次，每次殺孢子劑專用瓶中分別放置500 mL和750 mL的純水。
（2）噴嘴噴霧流量計(jì)算：噴霧流量＝ （加液量－殘液量）/噴霧時(shí)間。
（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：噴霧流量：連接電源開始工作時(shí)的噴霧流量應(yīng)達(dá)到1 000 mL/h；殘液量：0。

 性能確認(rèn) 

 過氧化氫滅菌效果的要求

滅菌是指殺滅細(xì)菌及其細(xì)菌繁殖體、 芽孢、 病毒和真菌孢子等一切形式的微生物的過程。 國際上為了量化無菌的標(biāo)準(zhǔn)，提出了無菌保證水平的概念，并以此來評(píng)價(jià)滅菌的殺滅效果。我國及歐美藥典都將 “無菌保證水平值不大于百萬分之一” 作為最終滅菌產(chǎn)品的無菌保證要求。

 氣化過氧化氫滅菌設(shè)備的位置確定

氣化過氧化氫滅菌設(shè)備噴頭的噴射方向與水平呈45°，干霧被噴射出來的初始速度非常快，由于自身的慣性作用，干霧離開噴頭的一小段距離整體呈弧線運(yùn)動(dòng)，慣性作用消失后干霧在空間中作無規(guī)則的布朗運(yùn)動(dòng)，彌漫擴(kuò)散到相對(duì)密閉空間的每一個(gè)角落。 但是，由于不同的企業(yè)潔凈區(qū)有不同的布局，在一定環(huán)境條件下，空間的布局直接影響到了干霧擴(kuò)散的快慢。 為了快速達(dá)到整個(gè)潔凈區(qū)擴(kuò)散完全混合均勻的最佳狀態(tài)，取得較好的滅菌效果，務(wù)必對(duì)設(shè)備的臺(tái)數(shù)及位置進(jìn)行全面的考慮和精確的擺放。
設(shè)備擺放位置應(yīng)遵循以下原則：
（1）優(yōu)先滿足核心區(qū)域；
（2）噴嘴遠(yuǎn)離墻壁和設(shè)備，避免遮擋噴霧；
（3）以易于干霧擴(kuò)散的位置為佳。

 消毒效果確認(rèn)

1、實(shí)驗(yàn)條件
（1）實(shí)驗(yàn)菌株：枯草桿菌黑色變種（ATCC9372）芽孢，抗力鑒定合格；嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953）芽孢，抗力鑒定合格。
（2）染菌載體：不銹鋼片、鋼針、聚四氟乙烯片等，載體回收菌量為1×106～5×106 cfu/載體。
（3）培養(yǎng)基：
胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：胰蛋白胨1.5 g/100 mL；大豆蛋白胨0.5 g/100 mL；氯化鈉0.5 g/100 mL；瓊脂1.6 g/100 mL。用蒸餾水配制而成，調(diào)節(jié)pH為7.2±0.2，經(jīng)過121 ℃壓力蒸汽滅菌后使用。
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（ TSB）：胰蛋白胨1.5 g/100 mL；大豆蛋白胨0.5 g/100 mL；氯化鈉0.5 g/100 mL。 用蒸餾水配制而成，調(diào)節(jié)pH為7.2±0.2，經(jīng)過121 ℃的壓力蒸汽滅菌后使用。溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液：蛋白胨10 g；葡萄糖7.5 g；蔗糖2.0 g；可溶性淀粉1.5 g；1%溴甲酚紫乙醇溶液1.3 mL；蒸餾水1 000 mL。將蛋白胨、 葡萄糖、 蔗糖溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH至7.2～7.4，加入1%溴甲酚紫乙醇溶液，搖勻后，每管分裝5 mL，于115 ℃ 壓力蒸汽滅菌30 min，置于4 ℃冰箱備用。
（4）中和劑：0.1%的硫代硫酸鈉。
（5）含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基。
（6）磷酸鹽緩沖液0.03 mol/L，pH為7.2。
（7）模擬醫(yī)療器械管腔：材質(zhì)、 內(nèi)徑和長(zhǎng)短應(yīng)與最難滅菌的消毒對(duì)象相一致。
（8）不銹鋼管腔：內(nèi)徑約為1.2～1.5 cm，長(zhǎng)度為3.0～5.0 cm，兩端有接口，可與模擬醫(yī)療器械管腔連接，不銹鋼管腔的內(nèi)體積應(yīng)小于或等于模擬醫(yī)療器械管腔的內(nèi)體積，管腔一端應(yīng)有可密封的接口便于放置染菌載體。

 2、布點(diǎn)選擇

選擇工藝關(guān)鍵房間，離干霧滅菌設(shè)備較遠(yuǎn)點(diǎn)，作為消毒效果確認(rèn)點(diǎn)

 3、滅菌效果測(cè)定操作程序

（1）將染菌載體放入模擬醫(yī)療器械管腔的中間位置或不銹鋼管腔內(nèi)，兩端分別連接模擬醫(yī)療器械管腔，置于專用滅菌包裝袋內(nèi)；
（2）加入規(guī)定量及規(guī)格的過氧化氫，并啟動(dòng)該滅菌程序，進(jìn)行滅菌處理試驗(yàn)；
（3）滅菌程序結(jié)束后，在無菌條件下取出染菌載體，將枯草桿菌黑色變種芽孢載體放入含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）培養(yǎng)液， 37 ℃培養(yǎng)，將嗜熱脂肪桿菌芽孢載體放入溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液， 56 ℃培養(yǎng)，作為試驗(yàn)組；
（4）將同批試驗(yàn)用的2個(gè)枯草桿菌黑色變種芽孢載體分別放入含5.0 mL稀釋液試管中，各振打200次；將同批試驗(yàn)用的2個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽孢載體分別放入含5.0 mL稀釋液試管中，各振打200次，進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，作為菌數(shù)對(duì)照組；
（5）將同批試驗(yàn)用的2個(gè)枯草桿菌黑色變種芽孢載體放入含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）培養(yǎng)液， 37 ℃培養(yǎng)；將同批試驗(yàn)用的2個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽孢載體放入溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液，56 ℃培養(yǎng)，作為陽性對(duì)照組；
（6）將同批試驗(yàn)用的2個(gè)未染菌載體放入含中和劑的TSB培養(yǎng)液，37 ℃培養(yǎng)，2個(gè)未染菌載體放入溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液，56 ℃培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照組；
（7）上述試驗(yàn)重復(fù)5次。

4、評(píng)價(jià)規(guī)定
滅菌合格標(biāo)準(zhǔn)：每次試驗(yàn)的菌數(shù)對(duì)照組回收菌量均為1×106～5×106 cfu/載體；陽性對(duì)照組有菌生長(zhǎng)；陰性對(duì)照組無菌生長(zhǎng)；試驗(yàn)組無菌生長(zhǎng)。

 9、結(jié)語

 當(dāng)前在對(duì)藥品日益嚴(yán)格的質(zhì)量訴求下，尋求規(guī)范的滅菌工藝、 科學(xué)的驗(yàn)證手段已成為制藥領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。過氧化氫滅菌作為一種新興的滅菌技術(shù)，因其具有無毒副殘留、 快速、 易于驗(yàn)證、 可靠安全等優(yōu)點(diǎn)，越來越被國內(nèi)外制藥界及生物技術(shù)領(lǐng)域所認(rèn)同與應(yīng)用。

文章來源：蒲公英

 

 

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